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MDT-TCR01N-1 组织(细胞)RNA提取试剂盒(柱式法)

组织(细胞)RNA提取试剂盒(柱式法)【预期用途】组织(细胞)RNA提取试剂盒(柱式法)用于从各种动物组织(虾、鱼、蟹等水生动物肌肉组织除外)、培养细胞以及各种...


商品详情

补充信息

【预期用途】

组织(细胞)RNA提取试剂盒(柱式法)用于从各种动物组织(虾、鱼、蟹等水生动物组织除外)、培养细胞以及各种体液或拭子细胞中分离纯化RNA

 

【检验原理】

破坏组织,释放细胞。裂解液裂解细胞释放核酸,并保护RNA不被核酸酶水解。细胞中和液清除DNA,硅胶膜高效吸附RNA,洗涤吸附柱,去除蛋白、盐等杂质。在洗脱液作用下,硅胶膜释放吸附的RNA,从而获得高质量的RNA

 

【试剂盒组成、贮藏及有效期】

产品编号

组成成分

50T

100T

200T

MDT-TCR01N-1

细胞裂解液N

25mL×1

50mL×1

100mL×1

中和缓冲液M

7.5mL×1

15mL×1

30mL×1

RAW1缓冲液

12mL×1

24mL×1

48mL×1

吸附柱(含收集管)

50

100

200

洗脱液A

5mL×1

10mL×1

20mL×1

使用说明书

1

1

1

所有试剂:常温(10-30℃)运输保存。有效期1年。

 

【注意事项】使用前务必认真阅读以下注意事项

1.   提前配制RAW1RAW1中乙醇含量低于60%会影响提取效率。

2.   提前配制80%乙醇水溶液,乙醇水溶液中乙醇含量低于80%会影响提取效率。

3.   本试剂盒在有效期内不同批号试剂可以互换。

4.   虽然本产品无氯仿、苯等OSHA规定的危险物品,但细胞裂解液N、中和缓冲液MRAW1缓冲液中含刺激性化合物,操作时最好做好必要的防护措施,戴口罩手套,并且在通风的生物安全柜中进行。

5.   按当地法律法规处理生物样本和废弃物。

 

【样本要求】

新鲜、液氮中保存或组织保存液中保存的组织或细胞;新鲜的尿液、脓液、胸腹水、肺泡灌洗液、脑脊液、组织渗出液、组织浸出液等体液以及各种拭子样本。

 

【适用范围】

5.0×106个细胞;≦20mg动物组织。


 

【样本用量及RNA得率】

1 样本用量及RNA得率

样本类型

样本用量

RNA得率(μg

上皮细胞

5.0×106

60-80

肝组织

5mg

20-70

肾组织

5mg

20-60

胃组织

5mg

10-38

脾组织

5mg

5-20

心肌

10mg

5-20

肠组织

10mg

15-40

脂肪组织

20mg

5-10


动物组织/植物组织/细胞(细菌)RNA提取试剂盒(柱式法)

一、产品亮点

1. 提取快速安全:独创的安全快速方法,提取过程无需苯酚、氯仿以及OSHA规定的有毒物质,提取环境相对安全;完成1个提取过程仅需20分钟。

2. 适用样本范围广:适用于革兰氏阴性细菌、培养细胞、各种动物组织和植物组织。

3. RNA完整性好RNA的完整系数(RIN728SrRNA/18SrRNA1

4. 提取效率高:10mg高丰度的动物组织平均可获得50μg左右的RNA80mg嫩叶或种子可获得50-70μg左右的RNA3.0×106的培养细胞平均可获得90μg左右的RNA

5. 纯度高:260/2302.0左右,260/2802.0左右,可直接用于酶切、PCR、分子杂交等各种分子生物学实验。

二、适用范围:5.0×106个细胞;2.0×109个革兰氏阴性细菌;20mg动物组织;100mg植物组织。

三、实验数据

1 R01.png2 R02.png3R03.png4细菌和痰液.png

1迈德泰克组织(细胞)RNA提取试剂盒(柱式法)与Trizol柱式法提取3×106个肺癌上皮细胞RNA(稀释10倍后3μL上样)的电泳结果。Lane1-2Trizol法提取的RNA电泳图;Lane3-6:迈德泰克提取的RNA电泳图;Trizol法和迈德泰克方法提取的平均浓度为586.75vs 607.18 ng/μL×100μL

2迈德泰克组织(细胞)RNA提取试剂盒(柱式法)与Trizol柱式法提取组织RNA的电泳结果。Lane1,3,5:迈德泰克方法提取的RNALane2,4,6Trizol法提取的RNALane1-2:肝组织(5mg)样本,提取浓度为526.4vs 509.6 ng/μL×100μL(稀释10倍后6μL上样);Lane3-4:肌肉组织(10mg)样本,提取浓度为33.3 vs 34.3 ng/μL×50μL6μL上样);Lane5-6:脾组织(5mg)样本,提取浓度为744.1vs 747.8ng/μL×100μL(稀释20倍后5μL上样)。

3迈德泰克植物组织RNA提取试剂盒(柱式法)提取植物RNA的电泳结果(稀释10倍后4μL上样)。Lane1-280mg嫩叶(779.4ng/μL×100μL,稀释20倍后4μL上样);Lane3-480mg种子(515.3ng/μL×100μL,稀释20倍后4μL上样);Lane5-6100mg根茎(336.5ng/μL×100μL,稀释20倍后4μL上样)。

4迈德泰克细胞(细菌)RNA提取试剂盒(柱式法)提取细菌和痰液标本中RNA的电泳结果。Lane1-2:革兰氏阴性细菌(大肠杆菌)(173.2ng/μL×100μL,稀释10倍后5μL上样); Lane3-4:液化后1mL痰液中的细胞沉淀(28.3ng/μL×50μL 5μL上样)。

 

迈德泰克 RNA提取产品与Trizol方法的比较

方法

适用样本

苯酚

氯仿

提取介质

操作复杂程度

RNA完整性

提取效率

DNA残留

Trizol

沉淀法

各种类型

复杂

易降解

较低

几乎无

柱式法

各种类型

吸附柱

较复杂

完整

几乎无

迈德泰克方法

柱式法

各种类型

×

×

吸附柱

简单

完整

几乎无

手工磁珠法

各种类型

×

×

磁珠

相对简单

完整

少量

自动磁珠法

各种类型

×

×

磁珠

自动

完整

少量







组织(细胞)RNA提取(柱式法)常见问题

常见问题

原因

解决方案

吸附柱堵塞

1.样本使用量过多

减少样本使用量,动物组织不超过20 mg,细胞不超过5 × 106个。

2.样品富含肌纤维

肌肉、心脏以及皮肤等富含肌纤维的样本建议采用液氮研磨方式处理,并增加研磨时间和力度

3.组织研磨或匀浆不充分

对于有些样本比如肌肉样本等,研磨或匀浆后先用12,000 × g离心裂解样本1min,再取上清进行后续提取。

未提取到RNA 或产量低

1.样本使用量过少

增加样本使用量,但动物组织不超过20 mg,细胞不超过5 × 106个。

2. .样本未及时保存或保存不当

样本保存温度不当或保存时间过长,内源性RNase导致RNA降解。采用新鲜、液氮保存或保存液保存的样本

3.组织研磨或匀浆不充分

增加研磨或匀浆时间和力度。

4.裂解液和中和缓冲液使用不当

按说明书正确加入裂解液和中和缓冲液。

5.取上清过程中吸出沉淀或膜样物质

尽量避免吸入沉淀和有些组织(比如肝脏)离心后产生的膜样物质。

6.异丙醇使用量过少或过多

按说明书准确加入异丙醇。

7. RAW1中乙醇添加比例不当

使用无水乙醇配制RAW1,使乙醇含量达60%

8. 80%乙醇水溶液配制不当

使用无水乙醇配制80%乙醇水溶液,乙醇含量达80%

9.洗脱不当

洗脱液加至膜中央,适当减少洗脱体积,可65°C 预热洗脱液、延长室温静置时间或者进行二次洗脱。

RNA降解

1.样本未及时保存或保存不当

采用新鲜、液氮保存或组织保存液(RNA Later)保存的样本。

2.样本反复冻融

避免样本反复冻融,分装保存。

3.电泳污染和环境污染

电泳前确保电泳槽、制胶板和电泳液无RNase污染,如有污染,使用洗洁精充分清洗电泳槽和制胶板,再用3%双氧水浸泡20 min,然后用RNase-free ddH2O进行冲洗;使用RNase-free ddH2O配制电泳缓冲液。

纯度低

1.盐离子残留

加入RAW1后闭盖静置30秒;避免RAW1接触吸附柱上下口;使用80%乙醇水溶液再洗涤1次。

2.蛋白残留

有些样本蛋白含量较高,容易导致蛋白残留。减少样本使用量;加入RAW1后闭盖静置30秒;增加1RAW1洗涤。

3.乙醇残留

最后一次洗涤后,吸附柱闭盖12,000×g再离心3分钟。

gDNA污染

1.样本使用量过高

不同样本中DNA含量相差大,减少样本使用量,动物组织不超过20 mg,细胞不超过5 × 106个。

2.裂解液和中和缓冲液使用不当

按说明书正确加入裂解液和中和缓冲液



 

 


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