MDT-BR01C 全血RNA提取试剂盒（DNase清除柱式法）
【预期用途】
全血RNA提取试剂盒（柱式法）用于从全血中分离纯化总RNA。
【检验原理】
裂解吸附液裂解细胞释放核酸，核酸保护剂保护RNA不被核酸酶水解。裂解吸附液促使核酸与蛋白质分离的同时，促使吸附柱内的硅胶膜高效吸附释放的核酸；经DNA清除工作液清除DNA后，洗涤吸附柱，去除蛋白、盐等杂质。在洗脱液作用下，硅胶膜释放吸附的RNA。
【试剂盒组成、贮藏及有效期】
产品编号 | 组成成分 | 50T | 100T | 200T |
MDT-BR01C | 裂解吸附液R | 15mL×1瓶 | 30mL×1瓶 | 60mL×1瓶 |
核酸保护剂 | 500μL×1支 | 1mL×1支 | 2mL×1支 | |
DNA清除剂缓冲液 | 2.5mL×1瓶 | 5mL×1瓶 | 10mL×1瓶 | |
DNase I储存液 | 500μL×1支 | 1mL×1支 | 2mL ×1支 | |
RAW1缓冲液 | 12mL×1瓶 | 24mL×1瓶 | 48mL×1瓶 | |
吸附柱（含收集管） | 50支 | 100支 | 200支 | |
洗脱液A | 3mL×1瓶 | 6mL×1支 | 12mL×1瓶 | |
使用说明书 | 1份 | 1份 | 1份 |
DNase I储存液: 2-8℃运输，-20℃保存；核酸保护剂：常温（10-30℃）运输，2-8℃保存；其他成分：常温（10-30℃）运输保存。有效期1年。
【注意事项】使用前务必认真阅读以下注意事项
1． 提前配制RAW1，RAW1中乙醇含量低于60%会影响提取效果。
2． 提前配制80%乙醇水溶液，乙醇水溶液中乙醇含量低于80%会影响提取效果。
3． 洗脱液的使用量太少会影响提取效果。
4． 当储存温度长时间低于10℃时，裂解吸附液R易出现结晶，使用前需温浴使结晶完全溶解。
5． 提取时室温太低，影响提取效率。
6． 本试剂盒在有效期内不同批号试剂可以互换。
7． 本产品无氯仿、苯等OSHA规定的危险物品，但RAW1缓冲液中含刺激性化合物，操作时做好必要的防护措施，戴口罩手套，并且在通风的生物安全柜中进行。
8． 按当地法律法规处理生物样本和废弃物。
【样本要求】
抗凝全血。全血抽取后应尽快提取RNA；如2小时后提取，全血需要保存于2-8℃，保存时间不超过72小时。长期使用的样本需-80℃或液氮保存，或者使用保存液按要求保存。溶血和脂血对提取无影响。
【样本用量及得率】
样本体积（μL） | RNA得率（μg） |
200μL全血 | 0.5-3.5 |
200μL白细胞层 | 3-10 |
全血RNA提取试剂盒（柱式法）
一、产品亮点
1. RNA完整性好：提取后RNA的完整系数（RIN）≧7，28SrRNA/18SrRNA≧1。
2. 效率高：DNA提取得率高，200μL全血平均可获得1.5μg左右的RNA。
3. 纯度高：260/280在2.0左右；260/230在2.0左右。
4. 操作简单快速：无需特殊设备，完成1次提取只需25分钟。
5. 提取环境安全：提取过程无苯酚、氯仿以及OSHA规定的有毒物质，提取环境相对安全。
二、适用范围：抗凝全血和白细胞层。
三、实验数据
图1 迈德泰克全血RNA提取试剂盒（柱式法）与Trizol方法提取200μL全血RNA的电泳结果。Lane1,3,5,7,9,11,13,15,17,19：迈德泰克柱式法提取的1-10号全血样本的RNA；Lane2,4,6,8,10,12,14,16,18,20：Trizol柱式法提取的1-10号全血样本的RNA。Lane1-2：样本1，提取浓度为17.7 vs 27.3 ng/μL；Lane3-4：样本2，提取浓度为38.4 vs 26.2 ng/μL；Lane5-6：样本3，提取浓度为20.9 vs 17.8 ng/μL；Lane7-8：样本4，提取浓度为38.6 vs 35.9 ng/μL；Lane9-10：样本5，提取浓度为28.10 vs 25.1 ng/μL；Lane11-12：样本6，提取浓度为33.0 vs 23.7 ng/μL；Lane13-14：样本7，提取浓度为116.7 vs 113.7 ng/μL；Lane15-16：样本8，提取浓度为46.4 vs 54.9 ng/μL；Lane17-18：样本9，提取浓度为52.0 vs 53 ng/μL；Lane19-20：样本10，提取浓度为46.2 vs 48.3 ng/μL。
图2 迈德泰克全血RNA提取试剂盒（柱式法）提取的全血RNA浓度与白细胞数量的相关性。
A
B 
C 
图3 迈德泰克全血RNA提取试剂盒（柱式法）提取的全血RNA与Trizol法的比较。A：两者提取浓度的相关性；B：260/280的比较；C：260/230的比较。
全血RNA提取（柱式法）常见问题
常见问题 | 原因 | 解决方案 |
未提取到RNA 或产量低 | 1.样本使用量过少 | 增加样本使用量。 |
2. 样本未及时保存或保存不当 | 样本保存温度不当或保存时间过长，内源性RNase导致RNA降解。采用新鲜、液氮保存或组织保存液（RNA Later）保存的样本。 | |
3.使用裂解吸附液R裂解全血时振荡速度不够 | 增加裂解时的振荡速度。 | |
4.异丙醇使用量过少或过多 | 按说明书准确加入异丙醇。 | |
5. RAW1中乙醇添加比例不当 | 使用无水乙醇配制RAW1，使乙醇含量达60%。 | |
6. 80%乙醇水溶液配制不当 | 使用无水乙醇配制80%乙醇水溶液，乙醇含量达80%。 | |
7.洗脱不当 | 洗脱液加至膜中央，适当减少洗脱体积，可65°C 预热洗脱液或延长室温静置时间。 | |
RNA降解 | 1.样本未及时保存或保存不当 | 采用新鲜、液氮保存或保存液保存的样本。 |
2.样本反复冻融 | 避免样本反复冻融，分装保存。 | |
3.电泳污染和环境污染 | 电泳前确保电泳槽、制胶板和电泳液无RNase污染，如有污染，使用洗洁精充分清洗电泳槽和制胶板，再用3%双氧水浸泡20 min，然后用RNase-free ddH2O进行冲洗；使用RNase-free ddH2O配制电泳缓冲液。 | |
纯度低 | 1.盐离子残留 | 加入RAW1后闭盖静置30秒；避免RAW1接触吸附柱上下口。 |
2.乙醇残留 | 最后一次洗涤后，吸附柱闭盖12,000×g再离心3分钟。 |
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