MDT-BD01血液基因组DNA提取试剂盒（柱式法）
【预期用途】
血液基因组DNA提取试剂盒（柱式法）用于从人或动物血液或血块中分离纯化基因组DNA。
【检验原理】
裂解吸附液和蛋白酶K使血液基因组DNA与蛋白质分离，在裂解吸附液高盐低pH的环境下，吸附柱内的硅胶膜高效吸附分离的DNA；洗涤吸附柱，去除蛋白、盐等杂质；在洗脱液低盐高pH值的情况下，硅胶膜释放吸附的DNA，从而达到快速分离纯化基因组DNA的目的。
【试剂盒组成、贮藏及有效期】
产品编号 | 组成成分 | 50T | 100T | 200T |
MDT-BD01 | 裂解吸附液D | 10mL×1瓶 | 20mL×1瓶 | 40mL×1瓶 |
蛋白酶K | 1mL×1支 | 2mL×1支 | 4mL×1瓶 | |
RAW1缓冲液 | 12mL×1瓶 | 24mL×1瓶 | 48mL×1瓶 | |
吸附柱（含收集管） | 50支 | 100支 | 200支 | |
洗脱液B | 10mL×1瓶 | 20mL×1瓶 | 40mL×1瓶 | |
使用说明书 | 1份 | 1份 | 1份 |
蛋白酶K：常温（10-30℃）运输，-20℃保存；
其他成分：常温（10-30℃）运输保存。有效期1年。
【注意事项】Ø使用前务必认真阅读以下注意事项
1． 提前配制RAW1，RAW1中乙醇含量低于60%会影响提取效果。
2． 提前配制80%乙醇水溶液，乙醇水溶液中乙醇含量低于80%会影响提取效果。
3． 洗脱液的使用量太少会影响提取效果。
4． 本试剂盒在有效期内不同批号试剂可以互换。
5． 虽然本产品无氯仿、苯等OSHA规定的危险物品，但操作时最好做好必要的防护措施，戴口罩手套，并且在通风的生物安全柜中进行。
6． 按当地法律法规处理生物样本和废弃物。
【样本要求】
EDTA抗凝的全血或血凝块。血液样本抽取后应尽快提取基因组DNA；如2小时后提取，样本需要保存于2-8℃，保存时间不超过72小时。长期使用的样本需-80℃或液氮保存，或者使用保存液按要求保存。溶血和脂血对提取无影响。
【适用范围】
≦200μL哺乳动物全血；＞200μL哺乳动物全血需使用溶血剂；5μL禽类、两栖类动物全血；≦1000μL哺乳动物血凝块。
【样本用量及得率】
样本类型 | 样本用量（μL） | DNA得率（μg） |
哺乳动物抗凝全血 | ≦200 | 1-30 |
＞200 | 与样本用量有关 | |
禽类、两栖类抗凝全血 | 5-10 | 3-80 |
血凝块 | ≦1000 | 1-40 |
血液基因组DNA提取试剂盒（柱式法）
一、产品亮点
1. 效率高，DNA长度长：DNA提取得率高，200μL全血平均可获得5μg DNA（3-14μg），提取的DNA长度约30Kbp。
2. 纯度高：260/280在1.85左右，260/230在2.0左右。
3. 操作简单快速：无需特殊设备，完成1次提取只需25分钟。
4. 提取环境安全：操作简便，提取过程无异丙醇和OSHA规定的有毒物质，提取环境相对安全。
二、适用范围：
≦200μL哺乳动物全血；＞200μL哺乳动物全血（需使用溶血剂）；5-10μL禽类、两栖类动物全血；≦1000μL哺乳动物血凝块。
三、实验数据
图1全血DNA电泳图。Lane1,3,5,7,9,11,13,15,17,19：迈德泰克柱式法血液基因组DNA提取试剂盒提取的全血DNA结果；Lane2,4,6,8,10,12,14,16,18,20：国外某著名柱式法提取的全血DNA结果；Lane1-2：样本1，白细胞数为2.6×109/L；Lane3-4：样本2，白细胞数为3.32×109/L；Lane5-6：样本3，白细胞数为4.6×109/L；Lane7-8：样本4，白细胞数为5.26×109/L；Lane9-10：样本5，白细胞数为6.24×109/L；Lane11-12：样本6，白细胞数为7.53×109/L；Lane13-14：样本7，白细胞数为8.3×109/L；Lane15-16：样本8，白细胞数为9.59×109/L；Lane17-18：样本9，白细胞数为10.58×109/L；Lane19-20：样本10，白细胞数为11.23×109/L。
图2 迈德泰克柱式法血液基因组DNA提取试剂盒提取的全血DNA浓度与白细胞数量的相关性。
A
B
C
图3 迈德泰克柱式法血液基因组DNA提取试剂盒提取的全血DNA与国外某著名品牌的比较。A：提取浓度的比较；B：260/280的比较；C：260/230的比较。
参数 | 迈德泰克产品 | Q品牌 （柱式法） | ||
柱式法 | 手工磁珠法 | 自动磁珠法 | ||
样品用量（μL） | 200 | 200 | 200 | 200 |
试剂用量（μL） | 200 | 200 | 200 | 200 |
蛋白酶K用量（μL） | 20 | 20 | 20 | 20 |
醇类沉淀DNA | 异丙醇/乙醇 | 异丙醇/乙醇 | 不用 | 乙醇 |
单个样本提取总时间 | 25-30分钟 | 25-30分钟 | 35分钟 | 25-30分钟 |
RNA残留 | 轻微 | 轻微 | 少量 | 轻微 |
260/230（离子残留） | 1.9-2.2（很少） | 1.7-2.0（少） | 1.7-2.0（少） | 1.8-2.0（少） |
RNase A | 用/不用 | 用/不用 | 用 | 用/不用 |
1次洗脱获得量（μg） | 3-14 | 5-20 | 3-12 | 3-13 |
操作复杂性 | 简单 | 简单 | 简单 | 简单 |
使用设备 | 离心机、振荡器、恒温金属浴 | 磁力架、离心机、振荡器、恒温金属浴 | 提取仪 | 离心机、振荡器、恒温金属浴 |
表1 迈德泰克血液基因组DNA提取试剂盒与国外某著名品牌的比较
【血液基因组DNA提取（柱式法）常见问题】
常见问题 | 原因 | 解决方案 |
未提取到DNA或产量低 | 1.样本使用量过多 | 减少有核红细胞样本的使用量，禽类、两栖类动物抗凝全血加入量一般为5-10µL，最大不超过20µL。 |
2.样本使用量过少 | 增加血液样本使用量，参考【适用范围】。 | |
3.样本未及时保存或保存不当 | 样本保存温度不当或保存时间过长，内源性DNase导致DNA降解。采用新鲜或正确保存的样本。 | |
4.样本裂解不充分 | 蛋白酶K失活。使用新鲜蛋白酶K。 | |
5.乙醇使用量过少或过多 | 按说明书准确加入无水乙醇。 | |
6. RAW1中乙醇添加比例不当 | 使用无水乙醇配制RAW1，使乙醇含量达60%。 | |
7. 80%乙醇水溶液配制不当 | 使用无水乙醇配制80%乙醇水溶液，乙醇含量达80%。 | |
8.洗脱不当 | 洗脱液加至膜中央，适当减少洗脱体积，可65°C 预热洗脱液、延长室温静置时间或者进行二次洗脱。 | |
DNA降解 | 1.样本未及时保存或保存不当 | 采用新鲜或正确保存的样本。 |
2.样本反复冻融 | 避免样本反复冻融，分装保存。 | |
3.使用EDTA以外的抗凝剂抗凝 | 其他抗凝剂可能加速DNA的降解。使用EDTA抗凝剂抗凝的样本，对新样品重新纯化。 | |
纯度低 | 1.盐离子残留 | 避免RAW1接触吸附柱上下口；使用80%乙醇水溶液再洗涤1次。 |
2.乙醇残留 | 最后一次洗涤后，吸附柱闭盖12,000×g再离心3分钟。 | |
RNA残留 | 1.样本使用量过高 | 减少血液样本使用量，参考【适用范围】。 |
