MDT-MD01-1微生物基因组DNA提取试剂盒(柱式法）-研磨管
【预期用途】
微生物基因组DNA提取试剂盒（柱式法）用于从革兰氏阳性细菌或真菌等含细胞壁的生物体中分离纯化出高质量、高浓度的基因组DNA。
【检验原理】
在高速振荡情况下，玻璃珠破坏微生物细胞壁。在裂解吸附液和蛋白酶K的作用下微生物基因组DNA与蛋白质分离，在裂解吸附液高盐低pH的环境下，吸附柱内的硅胶膜高效吸附分离的DNA；洗涤吸附柱，去除蛋白、盐等杂质；在洗脱液低盐高pH值的情况下，硅胶膜释放吸附的DNA，从而达到快速分离纯化基因组DNA的目的。
【试剂盒组成、贮藏及有效期】
产品编号 | 组成成分 | 50T | 100T | 200T |
MDT-MD01-1 | 消化液 | 2mL×1支 | 4mL×1瓶 | 8mL×1瓶 |
研磨管 | 50支 | 100支 | 200支 | |
裂解吸附液D | 10mL×1瓶 | 20mL×1瓶 | 40mL×1瓶 | |
RNA清除剂 | 750μL×1支 | 1.5mL×1支 | 3mL×1瓶 | |
蛋白酶K | 1mL×1支 | 2mL×1支 | 4mL×1瓶 | |
RAW1缓冲液 | 12mL×1瓶 | 24mL×1瓶 | 48mL×1瓶 | |
吸附柱（含收集管） | 50支 | 100支 | 200支 | |
洗脱液B | 5mL×1瓶 | 10mL×1瓶 | 20mL×1瓶 | |
使用说明书 | 1份 | 1份 | 1份 |
蛋白酶K：常温（10-30℃）运输，-20℃保存；
消化液和RNA清除剂：常温（10-30℃）运输，2-8℃保存；
其他试剂：常温（10-30℃）运输保存。有效期1年。
【注意事项】使用前务必认真阅读以下注意事项
1． 提前配制RAW1，RAW1中乙醇含量低于60%会影响提取效果。
2． 提前配制80%乙醇水溶液，乙醇水溶液中乙醇含量低于80%会影响提取效果。
3． 提前配制消化缓冲液。
4． 洗脱液使用量太少会影响提取效果。
5． 本试剂盒在有效期内不同批号试剂可以互换。
6． 虽然本产品无氯仿、苯等OSHA规定的危险物品，但操作时最好做好必要的防护措施，戴口罩手套，并且在通风的生物安全柜中进行。
7． 按当地法律法规处理生物样本和废弃物。
【样本要求】
新鲜的痰液、宫颈粘液、血清、血浆、乳液、粪便、尿液、胸腹水、肺泡灌洗液、脑脊液、各种拭子（宫颈刷）、培养物等。
【适用范围】
≤2.0×109个细菌；≤5.0×107个真菌
微生物基因组DNA提取试剂盒（研磨法）
一、产品亮点
1. 破壁效果好速度快：对革兰氏阳性菌和真菌的破壁速度快（10分钟内即可完成破壁）、效果好，克服了溶菌/溶壁酶法操作时间长，并且只对部分细菌的细胞壁有效的缺点。
2. DNA完整：迈德泰克研磨法提取的革兰氏阳性菌和真菌的DNA完整。
3. 操作简单快速：独创的快速方法，完成1次提取只需30分钟。
4. 提取环境安全：提取过程无苯酚、氯仿以及OSHA规定的有毒物质，提取环境相对安全。
二、适用范围：≦2.0×109个细菌；≦5.0×107个真菌
三、实验数据
表1 迈德泰克研磨法提取的革兰氏阳性菌DNA与溶菌酶法的比较
革兰氏阳性菌 | 260/280 | 260/230 | 浓度（ng/μL） | |||
研磨法 | 溶菌酶法 | 研磨法 | 溶菌酶法 | 研磨法 | 溶菌酶法 | |
粪肠球菌 | 1.85 | 1.82 | 1.99 | 1.89 | 140.8 | 96.0 |
表皮葡萄球菌 | 1.81 | 1.86 | 1.73 | 1.41 | 140.3 | 30.4 |
头状葡萄球菌 | 1.82 | 1.87 | 1.60 | 1.44 | 74.4 | 28.4 |
图 迈德泰克研磨法和溶菌酶法提取的革兰氏阳性菌DNA的电泳图（上样量2μL）。Lane1-2:研磨法vs溶菌酶法提取的粪肠球菌DNA；Lane3-4: 研磨法vs溶菌酶法提取的表皮葡萄球菌DNA；Lane5-6: 研磨法vs溶菌酶法提取的头状葡萄球菌DNA。
微生物基因组DNA提取（柱式法）常见问题解答
常见问题 | 原因 | 解决方案 |
吸附柱堵塞 | 样本使用量过多 | 减少样本使用量，使用量不超过2.0×109个细菌和5.0×107个真菌。 |
未提取到DNA 或产量低 | 1.样本使用量过少 | 增加样本使用量，但使用量不超过2.0×109个细菌和5.0×107个真菌。 |
2. 样本未及时保存或保存不当 | 样本保存温度不当或保存时间过长，内源性DNase导致DNA降解。采用新鲜、液氮保存或保存液保存的样本。 | |
3. 细胞壁破坏不充分 | 增加研磨速度和时间。 | |
4.样本裂解不充分 | 蛋白酶K失活。使用新鲜蛋白酶K；研磨时细胞壁破坏不充分，增加研磨速度和时间。 | |
5.乙醇使用量过少或过多 | 按说明书准确加入无水乙醇。 | |
6. RAW1中乙醇添加比例不当 | 使用无水乙醇配制RAW1，使乙醇含量达60%。 | |
7. 80%乙醇水溶液配制不当 | 使用无水乙醇配制80%乙醇水溶液，使乙醇含量达80%。 | |
8.洗脱不当 | 洗脱液加至膜中央，适当减少洗脱体积，可65°C 预热、延长室温放置时间或者进行二次洗脱。 | |
DNA降解或断裂 | 1. 样本未及时保存或保存不当 | 采用新鲜、液氮保存或保存液保存的样本。 |
2.样本反复冻融 | 避免样本反复冻融，分装保存。 | |
3.使用EDTA以外的抗凝剂抗凝 | 其他抗凝剂可能加速DNA的降解。使用EDTA抗凝剂抗凝的样本，对新样品重新纯化。 | |
4.研磨速度太快或时间太长。 | 降低研磨速度，较少研磨时间 | |
纯度低 | 1.盐离子残留 | 培养基残留，使用生理盐水洗涤细菌1次；避免RAW1接触吸附柱上下口；使用80%乙醇水溶液再洗涤1次。 |
2.蛋白残留 | 有些样本蛋白含量较高，容易导致蛋白残留。减少样本使用量；加入RAW1后闭盖静置30秒；增加1次RAW1洗涤。 | |
3.乙醇残留 | 最后一次洗涤后，吸附柱闭盖12,000×g再离心3分钟。 | |
RNA残留 | 1.样本使用量过高 | 不同样本RNA含量相差大，减少样本使用量，使用量不超过2.0×109个细菌和5.0×107个真菌。 |
2.样本处理时未加入RNA清除剂 | 按说明书正确加入RNA清除剂。 |
