MDT-CFD01游离DNA提取试剂盒（柱式法）
预期用途】
游离DNA提取试剂盒（柱式法）用于从1-5mL人或动物血浆（血清）或体液（包括滑膜液、脑脊液、胸水、腹水和尿液等）中分离纯化出高质量、高浓度的游离DNA。
【检验原理】
裂解吸附液和蛋白酶K使游离DNA与蛋白质分离，在裂解吸附液高盐低pH的环境下，吸附柱内的硅胶膜高效吸附分离的DNA；洗涤吸附柱，去除蛋白、盐等杂质；在洗脱液低盐高pH值的情况下，硅胶膜释放吸附的游离DNA，从而达到快速分离纯化游离DNA的目的。
【试剂盒组成、贮藏及有效期】
产品编号 | 组成成分 | 10T | 20T |
MDT-CFD01 | 裂解吸附液N50 | 50mL×2瓶 | 100mL×2瓶 |
蛋白酶K | 2.5mL×1瓶 | 5mL×1瓶 | |
RAW1缓冲液 | 6mL×1瓶 | 12mL×1瓶 | |
AW2缓冲液 | 3mL×1瓶 | 6mL×1瓶 | |
吸附柱（含收集管） | 10支 | 20支 | |
吸附柱延伸管 | 10支 | 20支 | |
转接头 | 10支 | 20支 | |
洗脱液B | 1.5mL×1支 | 3mL×1瓶 | |
使用说明书 | 1份 | 1份 |
蛋白酶K：常温（10-30℃）运输，-20℃保存；
其他试剂：常温（10-30℃）运输保存。有效期1年。
【注意事项】Ø使用前务必认真阅读以下注意事项
1． 提前配制RAW1，RAW1中乙醇含量低于60%会影响提取效果。
2． 提前配制AW2， AW2中乙醇含量低于80%会影响提取效果。
3． 提前配制裂解吸附液A
4． 洗脱液使用量太少会影响提取效果。
5． 本试剂盒在有效期内不同批号试剂可以互换。
6． 虽然本产品无氯仿、苯等OSHA规定的危险物品，但操作时最好做好必要的防护措施，戴口罩手套，并且在通风的生物安全柜中进行。
7． 按当地法律法规处理生物样本和废弃物。
【样本要求】
①血浆或血清：随机抽取全血，分离血清；用EDTA抗凝的全血分离血浆。滑膜液、脑脊液、胸水和腹水等样本根据需要用EDTA抗凝。
②样本尽快检测，超过2小时使用时需要保存于2-8℃，保存时间不超过72小时。长期使用的样本需-80℃或液氮保存，或者使用保存液按要求保存。
③溶血和脂血对提取无影响。
游离DNA提取试剂盒（柱式法/磁珠法）
一、产品亮点
1. 效率高：可以从5mL血浆（血清）中提取出至少40ng的游离DNA。
2. 纯度高：提取的游离核酸质量稳定、可靠，可直接用于酶切、PCR扩增、分子杂交和二代测序（NGS）等各种分子生物学实验。
3. 提取环境安全：提取过程无OSHA规定的有毒物质，提取环境相对安全。
二、适用范围：≦5mL血浆、血清或其它体液
三、实验数据
AB
C
图1 不同试剂盒提取的血浆游离DNA用安捷伦2100生物分析仪测定的DNA片段。A:Q公司提取结果的片段分析；B:迈德泰克柱式法提取结果的片段分析；C: 迈德泰克磁珠法提取结果的片段分析。
图2 以提取的血浆游离DNA为模板PCR扩增后的电泳结果。Lane1-2：102bp的β-Globin基因片段扩增结果；Lane3-4：137bp的SRY基因片段扩增结果；Lane5-6：268bp的β-Globin基因片段结果；Lane7-8：402bp的p53基因片段扩增结果；Lane9-10：1204bp的p53基因片段扩增结果。Lane1,3,5,7,9：Q公司提取的模板；Lane2,4,6,8,10：迈德泰克游离DNA提取试剂盒（磁珠法）提取的模板。
图3 以提取的血浆游离DNA为模板PCR扩增后的电泳结果。Lane1-2：102bp的β-Globin基因片段扩增结果；Lane3-4：268bp的β-Globin基因片段结果；Lane5-6：402bp的p53基因片段扩增结果。Lane1,3,5：Q公司提取的模板；Lane2,4,6：迈德泰克游离DNA提取试剂盒（柱式法）提取的模板。
游离DNA提取（柱式法）常见问题解答
提取常见问题 | 原因 | 解决方案 |
未提取到游离DNA 或产量低 | 1.全血使用EDTA以外的抗凝剂抗凝 | 其他抗凝剂可能加速血液DNA的降解。使用EDTA抗凝剂抗凝的血液，对新样品重新纯化。 |
2.样本使用量过少 | 增加样本使用量。 | |
3. 样本未及时保存或保存不当 | 样本保存温度不当或保存时间过长，内源性DNase导致游离DNA降解。采用新鲜、液氮保存或保存液保存的样本。 | |
4.样本反复冻融 | 避免样本反复冻融，分装保存。 | |
5.样本裂解不充分 | 蛋白酶K失活。使用新鲜蛋白酶K。 | |
6.异丙醇使用量过少或过多 | 按说明书准确加入异丙醇。 | |
7. 洗液RAW1中乙醇添加比例不当 | 使用无水乙醇配制RAW1，使乙醇含量达60%。 | |
8. 含80%乙醇的AW2配制不当 | 使用无水乙醇配制80%AW2，乙醇含量达80%。 | |
9.洗脱不当 | 洗脱液加至膜中央，适当减少洗脱体积，可65°C 预热洗脱液、延长室温静置时间或者进行二次洗脱。 | |
gDNA污染 | 1. 抽血过程中白细胞遭到破坏，基因组DNA释放到血浆/血清 | 重新抽血，避免白细胞遭到破坏。 |
2. 从抽血到血浆/血清制备之间时间过长，基因组DNA释放到血浆/血清 | 抽血后尽快分离血浆/血清。 | |
3.血浆/血清制备时离心时间或速度不够，有核细胞未彻底去除 | 增加离心时间或速度。 | |
纯度低 | 1.盐离子残留 | 避免RAW1接触吸附柱上下口。 |
2.乙醇残留 | 最后一次洗涤后，吸附柱闭盖12,000×g再离心3分钟。 |
