MDT-TCD01组织（细胞）DNA提取试剂盒（柱式法）
【预期用途】
组织（细胞）DNA提取试剂盒（柱式法）用于从各种组织、培养细胞（革兰氏阴性细菌）以及各种体液或拭子细胞中分离纯化出高质量、高浓度的基因组DNA。
【检验原理】
破坏组织，释放细胞。裂解吸附液和蛋白酶K使DNA与蛋白质分离。在裂解吸附液高盐低pH的环境下，吸附柱内的硅胶膜高效吸附分离的DNA；洗涤吸附柱，去除蛋白、盐等杂质；在洗脱液低盐高pH值的情况下，硅胶膜释放吸附的DNA，从而达到快速分离纯化基因组DNA的目的。
【试剂盒组成、贮藏及有效期】
产品编号 | 成分组成 | 50T | 100T | 200T |
MDT-TCD01 | 裂解吸附液D | 10mL×1瓶 | 20mL×1瓶 | 40mL×1瓶 |
蛋白酶K | 1mL×1支 | 2mL×1支 | 4mL×1瓶 | |
RNA清除剂 | 500μL×1支 | 1mL×1支 | 2mL×1支 | |
RAW1缓冲液 | 12mL×1瓶 | 24mL×1瓶 | 48mL×1瓶 | |
吸附柱（含收集管） | 50支 | 100支 | 200支 | |
洗脱液B | 10mL×1瓶 | 20mL×1瓶 | 40mL×1瓶 | |
使用说明书 | 1份 | 1份 | 1份 |
蛋白酶K：常温（10-30℃）运输，-20℃保存；
RNA清除剂：常温（10-30℃）运输，2-8℃保存；
其他试剂：常温（10-30℃）运输保存。有效期1年。
【注意事项】使用前务必认真阅读以下注意事项
1． 提前配制RAW1，RAW1中乙醇含量低于60%会影响提取效果。
2． 提前配制80%乙醇水溶液，乙醇水溶液中乙醇含量低于80%会影响提取效果。
3． 洗脱液的使用量太少会影响提取效果。
4． 本试剂盒在有效期内不同批号试剂可以互换。
5． 虽然本产品无氯仿、苯等OSHA规定的危险物品，但操作时最好做好必要的防护措施，戴口罩手套，并且在通风的生物安全柜中进行。
6． 按当地法律法规处理生物样本和废弃物。
【样本要求】
新鲜、液氮中保存或组织保存液中保存的组织或细胞（革兰氏阴性细菌）；新鲜的尿液、胸腹水、肺泡灌洗液、脑脊液等体液以及各种拭子样本。
【适用范围】
≦5.0×106个细胞；≦2.0×109个革兰氏阴性菌；≦20mg动物组织；≦100mg植物组织。
【样本用量及DNA得率】
样本类型 | 样本用量 | DNA得率（μg） |
上皮细胞 | 5.0×106个 | 20-30 |
对数生长期大肠杆菌 | 1mL | 15-20 |
肝组织 | ≦10mg | 15-50 |
肾组织 | ≦10mg | 20-100 |
肠组织 | ≦10mg | 20-70 |
胃组织 | ≦10mg | 20-70 |
脂肪组织 | ≦20mg | 3-15 |
叶 | ≦30mg | 2-10 |
苹果核 | ≦30mg | 6-25 |
一、产品亮点
1. DNA提取得率高，提取灵敏度高：5.0×106个细胞平均可获得＞50μgDNA，最低可提取1.0×104个细胞的DNA。
2. 适用样本范围广：适用于革兰氏阴性细菌、培养细胞、各种动物组织和植物组织。
3. 纯度高：260/280在1.85左右260/230在2.0左右。
4. 操作简单快速：无需特殊设备，完成1次提取只需25分钟。
5. 提取环境安全：操作简便，提取过程不包含异丙醇和OSHA规定的有毒物质，提取环境相对安全。
二、适用范围：≦5.0×106个细胞；≦2.0×109个革兰氏阴性细菌；≦20mg动物组织；≦100mg植物组织。
三、实验数据
表1 迈德泰克柱式法组织（细胞）DNA提取试剂盒提取的DNA量与细胞数量的关系
细胞数量 | 260/280 | 260/230 | 浓度（ng/μL） | DNA量（μg） | 洗脱体积（μL） |
5.0×106 | 1.86 | 2.28 | 261.0 | 52 | 200 |
1.0×106 | 1.85 | 2.29 | 90.2 | 18 | 200 |
1.0×105 | 1.87 | 4.64 | 5.8 | 1.16 | 200 |
1.0×104 | 2.68 | 2.47 | 1.6 | 0.32 | 200 |
图1 迈德泰克柱式法组织（细胞）DNA提取试剂盒提取的细胞DNA电泳图。Lane1: 5.0×106个细胞，上样1μL；Lane2: 1.0×106个细胞，上样2μL；Lane3: 1.0×105个细胞，上样10μL；Lane4: 1.0×104个细胞，上样10μL.
表2 迈德泰克柱式法组织（细胞）DNA提取试剂盒提取的不同样本DNA的量
样本类型 | 260/280 | 260/230 | 浓度（ng/μL） | DNA量（μg） | 洗脱体积（μL） |
鸡肝（5mg） | 1.85 | 1.86 | 154.8 | 30.96 | 200 |
鸡肾（5mg） | 1.90 | 1.96 | 207.7 | 41.54 | 200 |
树叶（50mg） | 1.99 | 1.88 | 26.1 | 5.22 | 200 |
苹果种子（20mg） | 1.93 | 1.68 | 13.1 | 2.62 | 200 |
苹果果肉（50mg） | 1.63 | 1.48 | 5.0 | 1.0 | 200 |
梨种子（20mg） | 1.78 | 1.29 | 27.0 | 5.4 | 200 |
虾肉（10mg） | 1.96 | 1.56 | 38.8 | 7.76 | 200 |
蟹肉（10mg） | 1.84 | 1.69 | 46.4 | 9.28 | 200 |
图2 迈德泰克柱式法组织（细胞）DNA提取试剂盒提取的不同组织DNA电泳图。Lane1:5mg鸡肝组织提取的DNA，上样量1.5μL；Lane2: 5mg鸡肾组织提取的DNA，上样量1.5μL； Lane3: 50mg叶子提取的DNA，上样量3μL；Lane4:20mg苹果种子提取的DNA，上样量3μL；Lane5:50mg苹果肉提取的DNA，上样量10μL；Lane6:20mg梨种子提取的DNA，上样量3μL；Lane7:10mg虾肉组织提取的DNA，上样量3μL；Lane8:10mg蟹肉组织提取的DNA，上样量3μL。
组织（细胞）DNA提取（柱式法）常见问题解答
DNA提取常见问题 | 原因 | 解决方案 |
吸附柱堵塞 | 1.样本使用量过多 | 减少样本使用量，动物组织不超过20 mg，植物组织不超过100 mg，细胞不超过5 × 106个，革兰氏阴性细菌不超过 2.0×109个。 |
2.样品富含肌纤维 | 肌肉、心脏以及皮肤等富含肌纤维的样本建议采用液氮研磨方式处理，并增加研磨时间和力度 | |
3.组织研磨或匀浆不充分 | 对于有些样本比如肌肉样本或植物样本等，研磨或匀浆后先用12,000 × g离心裂解样本1min，再取上清进行后续提取。 | |
未提取到DNA 或产量低 | 1.样本使用量过少 | 增加样本使用量，动物组织不超过20 mg，植物组织不超过100 mg，细胞不超过5 × 106个，革兰氏阴性细菌不超过 2.0×109个。 |
2. 样本未及时保存或保存不当 | 样本保存温度不当或保存时间过长，内源性DNase导致DNA降解。采用新鲜、液氮保存或保存液保存的样本。 | |
3.组织研磨或匀浆不充分 | 增加研磨或匀浆时间和力度。 | |
4.样本裂解不充分 | 蛋白酶K失活。使用新鲜蛋白酶K。 | |
5.乙醇使用量过少或过多 | 按说明书准确加入无水乙醇。 | |
6. RAW1中乙醇添加比例不当 | 使用无水乙醇配制RAW1，使乙醇含量达60%。 | |
7. 80%乙醇水溶液配制不当 | 使用无水乙醇配制80%乙醇水溶液，乙醇含量达80%。 | |
8.洗脱不当 | 洗脱液加至膜中央，适当减少洗脱体积，可65°C 预热洗脱液、延长室温静置时间或者进行二次洗脱。 | |
DNA降解或断裂 | 1. 样本未及时保存或保存不当 | 采用新鲜、液氮保存或组织保存液保存的样本。 |
2.样本反复冻融 | 避免样本反复冻融，分装保存。 | |
3.匀浆速度太快或时间太长。 | 降低匀浆速度，较少匀浆时间 | |
纯度低 | 1.盐离子残留 | 避免RAW1接触吸附柱上下口；使用80%乙醇水溶液再洗涤1次。 |
2.蛋白残留 | 有些样本蛋白含量较高，容易导致蛋白残留。减少样本使用量；加入RAW1后闭盖静置30秒；增加1次RAW1洗涤。 | |
3.乙醇残留 | 最后一次洗涤后，吸附柱闭盖12,000×g再离心3分钟。 | |
RNA残留 | 1.样本使用量过高 | 不同样本RNA含量相差大，减少样本使用量，动物组织不超过20 mg，植物组织不超过100 mg，细胞不超过5 × 106个，革兰氏阴性细菌不超过 2.0×109个。 |
2.样本处理时未加入RNA清除剂 | 按说明书正确加入RNA清除剂。 |
