【预期用途】

RNA纯化试剂盒用于从核酸混合物中纯化RNA，RNA片段总回收率大于80%。

【检验原理】

在结合缓冲液高盐低pH值的环境下，吸附柱内的硅胶膜高效吸附核酸；吸附的核酸经过DNA清除剂处理，硅胶膜表面只剩下RNA；洗涤吸附柱，去除蛋白、盐等杂质；在洗脱液低盐高pH值的情况下，硅胶膜释放吸附的RNA，从而达到快速纯化RNA的目的。

【试剂盒组成、贮藏及有效期】

所有成分：常温（10-30℃）运输保存，有效期1年。

【注意事项】使用前务必认真阅读以下注意事项

1．结合缓冲液使用前必须加入异丙醇，使异丙醇浓度达到30%。

2．提前配制RAW1，RAW1中乙醇含量低于60%会影响提取效果。

3．提前配制80%乙醇水溶液，乙醇水溶液中乙醇含量低于80%会影响洗涤效果。

4．提前配制DNA清除剂。

5．结合缓冲液包含pH指示剂，其在pH≤7.5时为黄色，缓冲液在较高pH下为橙色或紫色。吸附柱对RNA的吸附仅在pH≤7.5时有效，吸附最佳pH在5.0至7.0之间。

6．本试剂盒在有效期内不同批号试剂可以互换。

7．虽然本产品无氯仿、苯等OSHA规定的危险物品，但操作时最好做好必要的防护措施，带口罩手套，并且在通风的生物安全柜中进行。

8．按当地法律法规处理生物样本和废弃物。

【样本要求】

核酸混合物。

【自备器械和试剂】

小型高速离心机（最大离心力≥12,000×g）、金属浴、1.5mL离心管、DNase I (RNase-free)、无水乙醇和异丙醇等。

l  结合缓冲液配制：使用前按瓶身标签说明加入异丙醇，使异丙醇含量为30%，混匀后密封常温保存。

l  RAW1配制：RAW1缓冲液使用前按照瓶身标签说明加入相应量的无水乙醇，使乙醇含量为60%，混匀后密封常温保存。

l  80%乙醇水溶液配制：1份水加入4份无水乙醇，配制成80%乙醇水溶液，混匀后密封常温保存。

l  DNA清除剂配制：使用前在1mL DNA清除剂缓冲液中加入终浓度为0.1U/μL的DNase I (RNase-free)（自备）。

【标准操作步骤】

1．在1.5mL离心管中加入核酸产物和5倍核酸产物体积的结合液（使用前请确认已加入异丙醇），混匀。比如，50μL核酸产物加入300μL结合缓冲液。

2．检查混合液的颜色是否为黄色（类似于结合液的颜色）。如果混合液的颜色是橙色或紫色，加入10μL的3M乙酸钠混匀，使混合液的颜色变为黄色。

3．将吸附柱放入收集管中，转移混合液至吸附柱中，闭盖12,000×g离心1分钟。吸弃废液，将吸附柱重新放入收集管中。

4．开盖，在吸附柱中加入600μL RAW1，闭盖12,000×g，离心20秒。吸弃废液，将吸附柱重新放入收集管中。

5．开盖，在吸附柱中心的膜上加入40µL DNA清除剂。闭盖，金属浴中42℃孵育5分钟。

6．开盖，在吸附柱中加入600μL RAW1，闭盖12,000×g离心20秒。吸弃废液，将吸附柱重新放入收集管中。

7．开盖，在吸附柱中加入600μL 80%乙醇水溶液，闭盖12,000×g离心20秒。吸弃废液，将吸附柱重新放入收集管中。

8．开盖，在吸附柱中加入600μL 80%乙醇水溶液，闭盖12,000×g离心20秒。取出吸附柱，丢弃收集管。将吸附柱放入新的1.5mL离心管中。

9．闭盖12,000×g离心3分钟。取出吸附柱，丢弃离心管。

10．将吸附柱放入新的1.5mL离心管中，加入50µL洗脱液A至吸附柱中心，闭盖室温静置1分钟，12,000×g离心1分钟，收集洗脱液，备用。

Ø洗脱液A的使用量可以根据需要调整，但用量不得低于30µL。

Ø洗脱液的使用量太少会影响提取效果。