【预期用途】

PCR产物纯化试剂盒用于从PCR扩增产物中纯化DNA片段，DNA片段总回收率大于90%。

【检验原理】

在结合缓冲液高盐低pH值的环境下，吸附柱内的硅胶膜高效吸附PCR产物中的DNA；洗涤吸附柱，去除蛋白、盐等杂质；在洗脱液低盐高pH值的情况下，硅胶膜释放吸附的DNA，从而达到快速纯化DNA的目的。

【试剂盒组成、贮藏及有效期】

所有成分：常温（10-30℃）运输保存，有效期1年。

【注意事项】使用前务必认真阅读以下注意事项

1．结合缓冲液使用前必须加入异丙醇，使异丙醇浓度达到30%。

2.提前配制80%乙醇水溶液，乙醇水溶液中乙醇含量低于80%会影响提取效果。

3．结合缓冲液包含pH指示剂，其在pH≤7.5时为黄色，缓冲液在较高pH下为橙色或紫色。吸附柱对DNA的吸附仅在pH≤7.5时有效，吸附最佳pH在5.0至7.0之间。

4．本试剂盒在有效期内不同批号试剂可以互换。

5．虽然本产品无氯仿、苯等OSHA规定的危险物品，但操作时最好做好必要的防护措施，带口罩手套，并且在通风的生物安全柜中进行。

6．按当地法律法规处理生物样本和废弃物。

【样本要求】

PCR扩增产物。

【自备器械和试剂】

小型高速离心机（最大离心力≥12,000×g）、1.5mL离心管、无水乙醇和异丙醇等。

l  结合缓冲液配制：结合缓冲液使用前按瓶身标签说明加入相应量的异丙醇，使异丙醇含量为30%，混匀后密封常温保存。

l  80%乙醇水溶液配制：1份水加入4份无水乙醇，配制成80%乙醇水溶液，混匀后密封常温保存。

【标准操作步骤】

1．在1.5mL离心管中加入PCR产物和5倍PCR产物体积的结合缓冲液（使用前请确认已加入异丙醇），混匀。比如，50μL PCR产物加入250μL结合缓冲液。

Ø PCR产物片段小于100bp片段时，额外增加1倍PCR产物体积的异丙醇。比如，50μL小片段PCR产物额外加入50μL异丙醇。

2．检查混合液的颜色是否为黄色（类似于结合缓冲液的颜色）。如果混合液的颜色是橙色或紫色，加入10μL的3M乙酸钠混匀，使混合液的颜色变为黄色。

3．将吸附柱放入收集管中，转移混合液至吸附柱，闭盖12,000×g离心1分钟。吸弃废液，将吸附柱重新放入收集管中。

Ø转移液体时，避免液体接触吸附柱的管口。

5．开盖，在吸附柱中加入600μL 80%乙醇水溶液，闭盖12,000×g离心20秒。取出吸附柱，丢弃收集管。将吸附柱放入新的1.5mL离心管中。

6．闭盖12,000×g离心3分钟。取出吸附柱，丢弃离心管。

7.将吸附柱放入新的1.5mL离心管中，加入50µL洗脱液B至吸附柱中心，闭盖。室温静置3分钟，12,000×g离心1分钟，收集洗脱液，备用。

Ø洗脱液B的使用量可以根据需要调整，但不得低于30µL。

Ø洗脱液的使用量太少会影响提取效果。